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如何選擇符合實驗要求的ELISA試劑盒?

更新時間:2025-06-23  |  點擊率:207

  標(biāo)簽:Elisa 本生試劑盒 標(biāo)準(zhǔn)品 抗體 封板膜 一次性吸頭 大鼠試劑盒

  

  以下是天正信達(dá)選擇符合實驗要求的ELISA試劑盒的系統(tǒng)性指南,涵蓋關(guān)鍵篩選維度和實操建議:

  一、明確實驗核心需求?

  靶標(biāo)與物種匹配?

  確認(rèn)目標(biāo)蛋白名稱(如IL-6、TNF-α)及物種(人/大鼠/小鼠等),避免跨物種交叉反應(yīng)。

  特殊樣本(如腦脊液、唾液)需選擇已驗證兼容性的試劑盒。

  樣本類型適配?

  血清/血漿:選擇抗溶血、抗脂血干擾優(yōu)化的試劑盒。

  細(xì)胞上清:注意培養(yǎng)基成分(如高濃度BSA)是否干擾檢測。

  組織裂解液:需驗證裂解緩沖液與試劑盒兼容性。

  檢測類型選擇?

  雙抗體夾心法?:適用于大分子蛋白(>10kDa),靈敏度高。

  競爭法?:適合小分子(如激素、代謝物)檢測。

  二、性能參數(shù)評估?

  靈敏度與線性范圍?

  低豐度蛋白(如pg/mL級)需高靈敏度試劑盒。

  確保樣本濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),避免多次稀釋。

  重復(fù)性與穩(wěn)定性?

  批內(nèi)/批間變異系數(shù)(CV)應(yīng)<15%,優(yōu)選CV<10%的產(chǎn)品。

  驗證試劑盒開瓶穩(wěn)定性(如4℃保存1周是否可用)。

  抗體對驗證?

  優(yōu)先選擇雙單抗或經(jīng)Western Blot/質(zhì)譜驗證的抗體。

  交叉反應(yīng)率(CR)應(yīng)<10%,高特異性試劑盒CR可<1%。

  四、避坑指南?

  避免常見錯誤?

  不同批號試劑混用(洗滌液和終止液除外)。

  未閱讀說明書直接操作,忽略特殊樣本處理要求。

  質(zhì)控紅線?

  標(biāo)準(zhǔn)曲線R2<0.99或陽性對照OD值異常時需重做。

  選擇時建議橫向?qū)Ρ?-5家品牌,結(jié)合文獻(xiàn)和預(yù)實驗數(shù)據(jù)決策。

  ELISA試劑盒在選購時應(yīng)注意以下幾個方面:

  1、明確研究種屬:一般來說,廠家都會在產(chǎn)品名稱上標(biāo)明種屬。

  2、明確樣本類型:不同廠家驗證樣本類型不同,即使同一廠家不同試劑盒,其驗證樣本類型也不盡相同。特別是復(fù)雜的血漿樣本,因此購買前需仔細(xì)核對。

  3、會預(yù)測自己的目標(biāo)因子的濃度:一般來說,待測因子可以根據(jù)經(jīng)驗或資料獲得參考的檢測范圍,且正常人與疾病狀態(tài)存在差異。因而,必要時進行樣本的稀釋及選擇合適檢測范圍的試劑盒極其重要。

  4、檢查試劑盒進行過哪些質(zhì)控:質(zhì)控數(shù)據(jù)在說明書中即可找到,在購買前檢查試劑盒是否進行過嚴(yán)格的質(zhì)控實驗,包括批次內(nèi)(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)、摻入回收實驗、線性稀釋實驗及交叉反應(yīng)測試等,每個數(shù)據(jù)最好都看一下,確保的結(jié)果重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性。

  5、需檢測的因子數(shù)量:如果待測因子超過 5 個,且樣本量較小時,單因子 ELISA 檢測方法并不是好的選擇。建議考慮多因子檢測方法,可節(jié)約樣本及時間成本,也可保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確。

  注:以上資料僅供參考,不作為實際標(biāo)準(zhǔn),具體請咨詢技術(shù)老師。

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