ELISA實(shí)驗(yàn)必看:規(guī)范品溶解與稀釋的操作步驟
以下是ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品溶解與稀釋的規(guī)范操作步驟,綜合多個(gè)可靠來(lái)源整理而成:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備
平衡試劑:將標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋液取出后,室溫平衡30分鐘。
核對(duì)試劑:按說(shuō)明書(shū)確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)品濃度、稀釋液體積及所需孔位。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶與稀釋
初次復(fù)溶:
取1管凍干標(biāo)準(zhǔn)品,加入500 μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(或說(shuō)明書(shū)指定體積)。
靜置1–2分鐘,輕輕混勻后800g離心1分鐘,確保液體沉至管底。
梯度稀釋:
準(zhǔn)備6–7支離心管(標(biāo)記S1–S7或濃度梯度),每管加入200 μL稀釋液。
從S1管取150 μL至S2管混勻,依次倍比稀釋至S6管,S7管作為空白對(duì)照。
注意:部分試劑盒要求最終稀釋液濃度需覆蓋檢測(cè)范圍(如0.15–10 ng/mL)。
3. 加樣與孵育
酶標(biāo)板操作:
每孔加入50 μL稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品(建議雙孔平行)。
加入樣本或檢測(cè)抗體后,封板37℃孵育30–60分鐘。
注意事項(xiàng)
混勻方式:避免劇烈震蕩,推薦渦旋或移液槍吹打。
時(shí)效性:顯色后需在15分鐘內(nèi)終止并讀取OD值。
注:以上資料僅供參考,如需進(jìn)一步了解產(chǎn)品詳情,可參考品牌供應(yīng)商或技術(shù)老師。
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